關(guān)于厭氧菌的甘油保藏方法

厭氧菌的甘油保藏方法： 

1、 厭氧甘油的制備： 厭氧瓶或厭氧管中放置一定量的甘油，甘油的量根據(jù)需要加入，不要多加，因?yàn)閰捬醺视椭苽浜靡院蟛荒芊磸?fù)滅菌，反復(fù)滅菌甘油會(huì)變性而呈黃色，且有一股芳香味道。加入終濃度為0.04 %的 L-cysteine和 1 %的5 %的 N2S母液。往厭氧瓶中通N2，通氣時(shí)間和配制培養(yǎng)基時(shí)時(shí)間相同。蓋上塞子和蓋子。121 ℃， 20 min 滅菌后備用。 

2、 取新鮮菌液（對(duì)數(shù)期），在通N2 的情況下，用針筒和針頭往有菌液的厭氧管中加入終濃度為15-20 %的厭氧甘油，再通一會(huì)N2，目的是趕走在轉(zhuǎn)移甘油過(guò)程中帶進(jìn)去的O2。蓋上塞子和蓋子，混勻，凍于-80 ℃。 

3、 活化：用針頭和針頭吸取一定甘油保藏的菌液，加到培養(yǎng)基當(dāng)中，加的量一般要多于1 %，因?yàn)閰捬蹙纳锪勘容^小，一般2到5 %左右。目測(cè)加完甘油菌液的培養(yǎng)基是否渾濁，并作記錄。如果加入的菌液太多，造成一開(kāi)始培養(yǎng)基就比較渾濁，會(huì)干擾我們對(duì)菌是否生長(zhǎng)的判斷，而且甘油太多也會(huì)抑制菌的生長(zhǎng)。